吉賽生物提供RT-qPCR試劑盒，產(chǎn)品包含逆轉(zhuǎn)錄和定量PCR檢測(cè)配套試劑，可用于circRNA表達(dá)水平及差異的檢測(cè)分析，也適用于mRNA、lncRNA等。此外，吉賽生物還可分別提供單獨(dú)的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和定量PCR檢測(cè)試劑，供廣大用戶(hù)靈活使用。

本產(chǎn)品的TransScript RT Enzyme (M-MLV) 是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基礎(chǔ)上通過(guò)體外分子進(jìn)化技術(shù)獲得的全新逆轉(zhuǎn)錄酶。大幅提高了熱穩(wěn)定性，在50℃的半衰期超過(guò)240分鐘，并可在55℃長(zhǎng)時(shí)間反應(yīng)而保持穩(wěn)定，非常適合具有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA模板的逆轉(zhuǎn)錄。定量PCR檢測(cè)的試劑是使用SYBR Green I嵌合熒光法進(jìn)行qPCR的專(zhuān)用試劑。circRNA和lncRNA等表達(dá)豐度偏低，需要摸索多個(gè)條件才能優(yōu)化擴(kuò)增體系。本產(chǎn)品配合針對(duì)qPCR優(yōu)化的最適Buffer，可以有效抑制非特異擴(kuò)增，顯著提高擴(kuò)增效率，適用于進(jìn)行高靈敏度的qPCR反應(yīng)。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1、 試劑盒包含了Oligo dT和隨機(jī)引物，適用范圍廣；

2、 針對(duì)低拷貝RNA優(yōu)化的體系擴(kuò)增效率高，特異性強(qiáng)，靈敏度高；

3、 全方位配套的引物產(chǎn)品及技術(shù)服務(wù)：吉賽生物依托多年技術(shù)經(jīng)驗(yàn)，已驗(yàn)證circRNA引物1萬(wàn)多對(duì)，篩選出特異性引物達(dá)2000多對(duì)，并建立了“circRNA引物庫(kù)”，可向研究人員提供引物序列信息，同時(shí)可提供?circRNA qPCR引物設(shè)計(jì)、circRNA qPCR檢測(cè)服務(wù)，有效保障實(shí)驗(yàn)快速成功。

[1] IF13.493 The circFASN/miR-33a pathway participates in tacrolimus-induced dysregulation of hepatic triglyceride homeostasis. Signal Transduction and Targeted Therapy

[2] IF13.493 The circFASN/miR-33a pathway participates in tacrolimus-induced dysregulation of hepatic triglyceride homeostasis. Signal Transduction and Targeted Therapy

[3] IF9.229 In Vitro Study on the Piezodynamic Therapy with a BaTiO3-Coating Titanium Scaffold under Low-Intensity Pulsed Ultrasound Stimulation. ACS Applied Materials & Interfaces

[4] IF9.229 In Vitro Study on the Piezodynamic Therapy with a BaTiO3-Coating Titanium Scaffold under Low-Intensity Pulsed Ultrasound Stimulation. ACS Applied Materials & Interfaces

[5] IF8.886 Effects of long-term culture on the biological characteristics and RNA profiles of human bone-marrow-derived mesenchymal stem cells. Molecular Therapy-Nucleic Acids

A常見(jiàn)問(wèn)題

1、如何設(shè)置溶解曲線的溫度？

我們做測(cè)試的時(shí)候用的是ABI

7500的儀器，溶解曲線的設(shè)置都是儀器默認(rèn)的，所以溶解曲線用儀器默認(rèn)的即可。

2、GS0202-2試劑盒只能用于circRNA的逆轉(zhuǎn)錄嗎？

不是的，也可用于普通的mRNA和LncRNA的逆轉(zhuǎn)錄。

3、Reverse Transcription Primer中是否均包含Oligo dT和隨機(jī)引物，還是只包含其中一種引物？

包含了Oligo dT和隨機(jī)引物。

4、我們的熒光定量PCR試劑盒有哪些優(yōu)點(diǎn)？

擴(kuò)增效率高和特異性好。

5、在配置qPCR的反應(yīng)液時(shí)，反應(yīng)體系為20ul，模板量應(yīng)加多少合適？

建議用1ug的RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，逆轉(zhuǎn)錄后的產(chǎn)物稀釋5-10倍，取2ul cDNA進(jìn)行qPCR反應(yīng)。可根據(jù)客戶(hù)的實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。

6、GS0202-2試劑盒可用于cfRNA的逆轉(zhuǎn)錄嗎？

可以的。

7、GS0202試劑盒的引物設(shè)計(jì)合成需要我們提供哪些信息？

需要提供種屬信息、相關(guān)的circRNA ID號(hào)和序列。

8、里面master mix中是否可以直接跑電泳，還需要上樣緩沖液么？

需要加。

9、CT 值出現(xiàn)太晚或檢測(cè)為陰性

a. 擴(kuò)增效率極低：優(yōu)化反應(yīng)條件，嘗試三步法擴(kuò)增程序。

b. 模板濃度太低：減少稀釋度重復(fù)試驗(yàn)，一般未知濃度的樣品先從最高濃度做起。

c. 模板降解：重新制備模板，重復(fù)試驗(yàn)。

10、反應(yīng)結(jié)束無(wú)擴(kuò)增曲線出現(xiàn)

a. circRNA 在細(xì)胞株或組織中不表達(dá)：更換模板。

b. 反應(yīng)循環(huán)數(shù)不夠：一般設(shè)置循環(huán)數(shù)為 40，但需要注意的是過(guò)多的循環(huán)數(shù)會(huì)增加過(guò)多的背景信號(hào)，降低數(shù)值可信度。

c. 確認(rèn)程序中是否設(shè)置了信號(hào)采集步驟：兩步法擴(kuò)增程序一般將信號(hào)采集設(shè)置在退火延伸階段；三步法擴(kuò)增程序應(yīng)當(dāng)將信號(hào)采集設(shè)置在 72℃延伸階段。

d. 模板濃度太低：減少稀釋度重復(fù)試驗(yàn)，一般未知濃度的樣品先從最高濃度做起。

e. 模板降解：重新制備模板，重復(fù)試驗(yàn)。

11、陰性對(duì)照也出現(xiàn)明顯擴(kuò)增

反應(yīng)體系或水被污染：更換新的 Mix 或者水重復(fù)試驗(yàn)。反應(yīng)體系在超凈工作臺(tái)內(nèi)配置，減少氣溶膠污染。

12、實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差

a. 加樣體積失準(zhǔn)：使用性能較好的移液槍?zhuān)瑪U(kuò)大反應(yīng)體積，將模板做高倍稀釋?zhuān)源篌w積加入反應(yīng)體系中。

b. 定量 PCR 儀不同位置溫度控制不一致：定期校準(zhǔn)儀器。

c. 模板濃度太低：模板濃度越稀，重復(fù)性越差，較少模板稀釋度或者提高加樣體積。

13、本產(chǎn)品是否可以 4℃儲(chǔ)存

a. 不可以。4℃儲(chǔ)存將會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)品活性下降。

b. 該產(chǎn)品-20℃儲(chǔ)存可以長(zhǎng)期保持活性，推薦-20℃儲(chǔ)存。

c. 因反復(fù)凍融也可能導(dǎo)致產(chǎn)品活性下降，因此當(dāng)每次用量較小時(shí)，推薦小體積分裝后-20℃儲(chǔ)存。

B注意事項(xiàng)

1、本產(chǎn)品盡量避免反復(fù)凍融，以免酶活下降。如每次使用量較少，推薦小份分裝使用。

2、使用前請(qǐng)上下顛倒混勻，請(qǐng)勿渦旋以免產(chǎn)生過(guò)多氣泡引起反應(yīng)體系失準(zhǔn)，進(jìn)而影響定量結(jié)果。混勻后輕微離心后即可使用。如操作不慎產(chǎn)生氣泡，請(qǐng)?jiān)俅坞x心后使用。

3、由于產(chǎn)品中的 2×qPCR SYBR Green Master Mix 含有熒光染料 SYBR Green I， 因此無(wú)論保存 Mix還是配置反應(yīng)體系時(shí)都應(yīng)該盡量避免強(qiáng)光照射。