服務介紹

核糖體是大部分細胞中體積最大的大分子之一，密度較高，基于這些特點，Polysome-seq利用蔗糖梯度超速離心法可分離游離、結合40S核糖體小亞基、結合60S核糖體大亞基或結合單/多個核糖體的mRNA分子。將上述感興趣的各個組分的溶液進行濃縮、提取RNA，然后通過高通量測序分析，能有效地分析翻譯組，如翻譯效率、非編碼RNA的翻譯或與翻譯調控高度相關的非翻譯區（UTRs），有利于研究從RNA到蛋白之間的翻譯水平調控機制。

技術應用

① 準確檢測蛋白翻譯效率；

② 分析目標RNA降解、翻譯起始和抑制等機制，研究翻譯調控與基因表達；

③ 挖掘潛在翻譯的非常規RNA，如lncRNA、circRNA的翻譯。

技術優勢

① 蔗糖梯度密度離心分離多聚核糖體和單核糖體，更準確獲取目標翻譯研究對象的數據；

② 直觀反映動態翻譯狀態；

③ 可鑒定mRNA上核糖體的結合情況；

④ 獲取翻譯中的RNA較長片段，有利于研究非編碼區、lncRNA、circRNA等非常規RNA的翻譯。

吉賽Polysome-seq技術服務項目

翻譯組重構控制飲食及其對腫瘤發生的影響

標題：Remodelling of the translatome controls diet and its impact on tumorigenesis

發表期刊：Nature

發表時間：2024年8月14日

利用高通量測序技術（PolyRibo-seq），分析小鼠模型肝臟在禁食狀態下的翻譯組變化。使用肝臟組織樣本進行多聚核糖體超速離心分級分離，得到含有不同數量核糖體的mRNA。將分離出的mRNA進行純化，并用于建文庫測序。研究顯示在禁食期間，全局翻譯下降，肝臟細胞選擇性地重構翻譯組。

c. 蔗糖梯度分離喂食和禁食24 h的WT肝裂解物的代表性多聚核糖體圖譜。無翻譯或低翻譯部分(2-7)和多聚核糖體部分(8-13)用于PolyRibo-seq；

d. 空腹時轉錄本翻譯效率(TE)的log2倍變化(FC)火山圖。紅點表示翻譯水平顯著上調的基因；

e. 以Wiki通路為基礎，富集了翻譯顯著上調的基因；

f：在喂食和禁食的WT肝臟蔗糖梯度部分，指示mRNA分布的百分比。