外泌體(Exosome)是真核細胞內體中產生的細胞外囊泡(EV),直徑約為30-150 nm,具有雙層膜,天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細胞培養基等生物體液中。外泌體攜帶有很多的遺傳物質和參與細胞活動調控的重要蛋白,可通過自分泌或旁分泌途徑被細胞吸收,也可經循環系統被遠距離靶組織或器官所吸收,參與各種正常和病理功能的細胞間通訊,在生命科學研究和生物技術中引起了人們的關注。外泌體能夠通過生物屏障,在細胞間傳遞功能性核酸分子,從而發揮各種生物學功能,有望成為一種新型給藥途徑及基因治療載體。
圖1 不同類型細胞的外泌體[1]
一、外泌體提取與鑒定
① 使用外泌體提取試劑盒提取外泌體。
② 納米顆粒跟蹤分析(Nanoparticle Tracking Analysis, NTA):快速實時動態檢測提取得到的外泌體的顆粒粒徑、散射光強、濃度等,分析外泌體的粒徑大小、數量和質量。
圖2 NTA檢測外泌體粒徑
③ 透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope, TEM):檢測外泌體的雙層囊膜結構(亞顯微結構)和形態。
圖3 TEM檢測外泌體形態
④ Western Blot:提取外泌體總蛋白, WB檢測外泌體常見指標:CD63/ CD81/ CD9/ TGS101/ HSP70 /Alix等。
圖4 WB檢測外泌體標志CD81[2]
相關技術服務
外泌體提取、電鏡TEM、粒徑NAT、WB
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二、外泌體內容物研究
外泌體內可能含有DNA、mRNA、miRNA、ncRNA、蛋白質和小分子代謝物等,可利用轉錄組學、蛋白組學、表觀組學、代謝組學的研究手段對外泌體內容物進行定量和定性分析。
相關服務
外泌體蛋白分析:DIA蛋白質組、Label free蛋白質組
外泌體修飾蛋白分析:磷酸化labelfree
外泌體代謝分析:非靶代謝、脂質組
外泌體轉錄分析:Exosome RNA-seq、miRNA-seq
案例文獻
[1] Lai JJ et al. Exosome Processing and Characterization Approaches for Research and Technology Development. Adv Sci (Weinh). 2022 May;9(15):e2103222.
[2] Qiu Z et al. Human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosomal miR-335-5p attenuates the inflammation and tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation of renal tubular epithelial cells by reducing ADAM19 protein levels. Stem Cell Res Ther. 2022, 13(1):373.