產品簡介

T7高產量RNA合成試劑盒使用T7 RNA聚合酶（T7 RNA Polymerase）進行體外轉錄，以含有T7啟動子序列的線性雙鏈DNA為模板、NTPs為底物對啟動子下游DNA序列進行轉錄，使客戶能夠簡單快速地獲得大量RNA產物。本試劑盒也能以修飾核苷為底物獲得生物素、染料或放射性標記的RNA，以帽子結構或帽子類似結構為底物獲得加帽的RNA。本試劑盒內含常用的修飾核苷供轉錄需求選擇使用。

應用場景

轉錄合成的RNA可用于RNA結構和功能研究、RNase保護、探針雜交、anti-sense RNA和 RNAi等應用，也可通過加帽加尾產生mRNA，用于體外翻譯、轉染等下游應用。

運輸與保存方法 

≤0℃運輸；-25℃~-15℃保存。

1、轉錄產物產量低或轉錄失敗

模板的質量與產量密切相關，實驗組產量明顯低于對照組可能原因有：①可能是模板自身原因；②實驗模板中有抑制反應的成分。

建議：①重新純化模板；②確定模板定量以及其完整性；③延長反應時間；④加大模板投入量；⑤嘗試其它的啟動子和RNA聚合酶。

2、產物電泳拖尾現象

可能原因有：①實驗操作過程被RNase污染；②DNA模板被RNase污染。

建議：①實驗過程中使用RNase-free的槍頭和EP管，佩戴一次性乳膠手套和口罩，所有試劑均用RNase free H2O 配制；②重新純化模板DNA。

3、RNA轉錄長度大于預期

如果電泳后的條帶大于目標條帶，可能原因有：①質粒模板沒有完全線性化；②RNA存在未完全變性的二級結構；③有義鏈3'端為突出結構。

建議：①確認模板結構，檢查模板是否完全線性化，如有必要，額外進行線性化；②將電泳方式由瓊脂糖膠換成變性膠來檢測RNA產物。

4、RNA轉錄長度小于預期

如果電泳后的條帶小于于目標條帶，可能原因有：①模板序列中包含類似于T7 RNA聚合酶的終止序列；②模板中GC含量高形成高級結構。

建議：①降低反應溫度（比如，30℃），有時降低溫度可以增加轉錄長度，但會降低產量；②不同的聚合酶識別不同的終止序列，若模板中含終止結構，建議嘗試不同的 RNA 聚合酶；③若模板GC含量高，采用42℃進行轉錄反應，或者添加SSB蛋白提高轉錄效率。