T7低dsRNA高產量RNA合成試劑盒經過T7 RNA Polymerase突變體的篩選與轉錄反應體系的優化,以含有T7啟動子序列的線性雙鏈DNA為模板、NTPs為底物對啟動子下游DNA序列進行轉錄,簡單快速地獲得大量RNA產物,同時產物中的dsRNA較低。T7低dsRNA高產量RNA合成試劑盒也能以修飾核苷為底物獲得生物素、染料或放射性標記的RNA,以帽子結構或帽子類似結構為底物獲得加帽的RNA。本試劑盒內含常用的修飾核苷N1-Me-pUTP供轉錄需求選擇使用。
本試劑盒一個反應能夠轉錄獲得150~200μg的RNA產物,并可放大生產毫克級別的RNA。
轉錄合成的RNA可用于RNA結構和功能研究、RNase保護、探針雜交、anti-sense RNA和RNAi等應用,也可通過加帽加尾產生mRNA,用于體外翻譯、轉染等下游應用。
≤0℃運輸;-25℃~-15℃條件下可保存一年;避免反復凍融。
1、轉錄產物產量低或轉錄失敗
①可能是模板自身原因,建議重新純化或線性化模板;
②重新確認模板定量及完整性;
③加大模板投入量;
2、產物電泳拖尾現象
①實驗操作過程被 RNase 污染;②DNA 模板被 RNase 污染;
3、RNA 產物片段與預期不符
①質粒模板沒有完全線性化;
②RNA 存在未完全變性的二級結構,建議使用變性膠檢測 RNA 產物;
③模板 GC 含量高,可能形成高級結構;
④RNase 污染;
⑤模板序列中包含類似 T7 RNA 聚合酶終止序列,導致轉錄提前終止,建議嘗試不同的 RNA聚合酶。