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T7 耐高溫高產量 RNA 合成試劑盒可在較高溫度 50℃下進行體外轉錄,以含有 T7 啟動子序列的線性雙鏈 DNA 為模板、NTPs 為底物對啟動子下游 DNA 序列進行轉錄,獲得 RNA 產物。T7 耐高溫高產量 RNA 合成試劑盒也能以修飾核苷為底物獲得生物素、染料或放射性標記的RNA,以帽子結構或帽子類似結構為底物獲得加帽的 RNA。高溫反應有助于減少 dsRNA 副產物的形成,減少轉錄產物 RNA 的免疫原性。
本試劑盒內含常用的修飾核苷 N1-Me-pUTP供轉錄需求選擇使用。
本試劑盒一個反應能夠轉錄獲得 150~200μg 的 RNA 產物,并可放大生產毫克級別的 RNA。
轉錄合成的 RNA 可用于 RNA 結構和功能研究、RNase 保護、探針雜交、anti-sense RNA 和RNAi 等應用,也可通過加帽加尾產生mRNA,用于體外翻譯、轉染等下游應用。
≤0℃運輸;-25℃~-15℃條件下可保存一年。
耐熱性強:
GSPure?T7 Thermostable and High Yield RNA Synthesis Kit在50℃下仍能保持活性并高效轉錄。
轉錄長度范圍廣:
GSPure?T7 Thermostable and High Yield RNA Synthesis Kit在合成300~6000nt長度的轉錄本時保持優良的轉錄效果。
轉錄產量高:
GSPure?T7 Thermostable and High Yield RNA Synthesis Kit的30μL反應體系中,1μg DNA模板投入可合成250~300μg RNA。
1、轉錄產物產量低或轉錄失敗
①可能是模板自身原因,建議重新純化或線性化模板;
②重新確認模板定量及完整性;
③加大模板投入量;
2、產物電泳拖尾現象
①實驗操作過程被 RNase 污染;②DNA 模板被 RNase 污染;
3、RNA 產物片段與預期不符
①質粒模板沒有完全線性化;
②RNA 存在未完全變性的二級結構,建議使用變性膠檢測 RNA 產物;
③模板 GC 含量高,可能形成高級結構;
④RNase 污染;
⑤模板序列中包含類似 T7 RNA 聚合酶終止序列,導致轉錄提前終止,建議嘗試不同的 RNA聚合酶。